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1.1在动物的选择
一般多选用大鼠、家兔、豚鼠等动物来制备含药血清，但不同种属的动物，其血清成分不同，因此在选择动物时应尽量选用与人类生物学活性近似的物种。刘成海等提出在体外培养实验中宜采用同一种单一血清，既为细胞提供营养，又为药物提供载体，还避免了多种血清的干扰，一般家兔和大鼠应为首选。
1.2灌胃次数与时间间隔
有7～10d法（1次/d，连用7～10d），3次给药法（连续给药3次，笫1、2次间隔20h，第2、3次间隔4h），2次给药法（第1次给药后2h，再以相同剂量重复1次）等。各种给药方式都是为了达到稳态血药浓度，从而便于药物作用机理的研究。不过严格地说应该按药物半衰期给药，连续5～7个半衰期达到稳态血药浓度，但由于中药及其复方成分复杂，半衰期很难测定，所以7～10d给药为权宜之计。如果对药物血清时效关系进行研究，则应另当别论。
1.3给药剂量
在实验中，由于含药血清加入体外反应系统后，浓度将被稀释，从而达不到在体条件下的药物浓度，反应系统可能出现假阴性反应，针对此种情况，李氏等提出按新药药理研究的技术要求设计剂量给药，将含药血清制成冷冻干燥粉（冻干粉），以冻干粉形式加入反应系统，使之达到所需要的浓度。刘平认为给药剂量应以整体模型动物的有效剂量（即为临床成人剂量的8～18倍量）为妥。
1.4含药血清的采集
大鼠一般给药1～2h后血药浓度达峰值，此时血清为最佳含药血清，超过一天的时间，大部分药物成分已经被代谢和排泄，药物的直接作用消失，此时的血清为机体功能状态血清。当然还要考虑例外，因此最好是通过预实验来确定最佳采血时间。
1.5含药血清灭活与否
许多学者观点不一。有的将含药血清经56℃30min灭活，但也有的不经灭活，直接进行体外实验。刘成海等发现正常大鼠血清无论灭活与否均可维持大鼠肝贮脂细胞的贴壁生长，两组大鼠血清对肝贮脂细胞内3H-TdR掺入的影响无明显差异，刘氏主张血清经56℃30min灭活，可排除非药理性干扰。但徐海波等认为药物血清不宜灭活，因血清经灭活以后，血清中含有的机体在药物作用下产生的内源性有效成分将减少或丧失，生物活性降低，会影响药理实验结果，而且与体内实验和临床用药情况也不相符。对于血清非药理性干扰可采取空白对照来衡定和排除，而细胞培养中的微生物感染，也可用微孔滤膜除菌法来防止。 |
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发表于 2011-5-18 11:15:55
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